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大腸桿菌顯色培養(yǎng)基在實驗過程中要怎么操作及注意些什么

更新時間:2020-04-24  |  點擊率:1457
  大腸桿菌顯色培養(yǎng)基的原理
  結(jié)合了顯色原和熒光基團,檢測β-葡萄糖醛酸酶的存在
  大腸桿菌-藍至綠色,陽性β-葡萄糖醛酸酶和陽性熒光
  其他大腸菌群-無色,陰性β-葡萄糖醛酸酶和陰性熒光
  膽鹽混合物增加選擇性-革蘭氏陽性菌被抑制
  操作步驟:
  1、按國家標準、SN標準、FDA標準或其它方法制備樣品液
  2、取樣品液1ml加入冷卻至45-50℃顯色培養(yǎng)基中混勻或涂布于平板上
  3、36±1℃培養(yǎng)18~24h,選用有30~200個菌落的平板,計數(shù)平板上出現(xiàn)的典型大腸桿菌菌落。大腸桿菌典型菌落為藍綠色,其它細菌為無色或黃色菌落。
  總大腸桿菌=藍綠色菌落
  4、對可疑大腸桿菌菌落可劃線接種到營養(yǎng)瓊脂平板上,36±1℃培養(yǎng)12-16小時,挑取單菌落做大腸桿菌全套生化試驗
  大腸桿菌顯色培養(yǎng)基操作注意事項
  1、切片脫蠟應(yīng)盡量干凈。
  2、組織固定起著非常重要的作用,使用不同的固定液可延或縮短染色時間。
  3、經(jīng)典三色染色中,常要求使用試劑(A)染核,也可用蘇木精染核,但蘇木精染核后切片顏色不夠鮮艷,因為染色目的主要在于區(qū)分膠原纖維和肌纖維,一般也可以省略該染色步驟。
  4、試劑(B)的分化時間應(yīng)該依據(jù)切片厚薄、組織的類別和新舊而定,。
  5、試劑(E)為0.2%乙酸水溶液,可使色彩更清晰鮮艷,如果使用量大可自行配制。
  6、用試劑(F)分化要在鏡下控制,分化到膠原纖維呈淡紅色;纖維呈紅色即可。分化時間根據(jù)染色深淺而定,一般1~2min。
  7、返藍液常使用氨水水溶液,亦可自行配制Scoot促藍液或0.1~1%碳酸鋰水溶液,該產(chǎn)品森貝伽有售。
  8、為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
  9、使用場所應(yīng)通風(fēng),并遠離火源。
  以上便是今天關(guān)于大腸桿菌顯色培養(yǎng)基在實驗過程中要怎么操作及注意些什么的全部分享了,希望對大家今后使用本設(shè)備能有幫助。
 
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