描述:VenorGeM支原體污染檢測(cè)試劑盒(一步法)支原體PCR檢測(cè) 采用常規(guī)PCR方法,并包含PCR需要的所有試劑。其中引物和dNTP、DNA聚合酶、內(nèi)控對(duì)照都包含在PCR預(yù)混液(Mix)干粉中。重懸緩沖液復(fù)溶Mix干粉,分裝到PCR管中,分別加入細(xì)胞上清(陰性對(duì)照)、復(fù)溶的陽(yáng)性對(duì)照DNA和待測(cè)樣品(細(xì)胞上清或提取的樣本DNA),進(jìn)行PCR反應(yīng)。常規(guī)PCR Kit(一步法)
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應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè) |
常規(guī)PCR Kit (一步法)
Venor®Gem OneStep
品名 | 貨號(hào) | 規(guī)格 | 價(jià)格 |
常規(guī)PCR Kit (一步法) Venor®Gem OneStep | 11-8025 | 25次/盒 | 詢價(jià) |
11-8050 | 50次/盒 | 詢價(jià) | |
11-8100 | 100次/盒 | 詢價(jià) | |
11-8250 | 250次/盒 | 詢價(jià) |
常規(guī)PCR Kit(一步法)介紹:
常規(guī)PCR法:是根據(jù)支原體核糖體16s-23s rRNA的特異保守序列設(shè)計(jì)引物,對(duì)待檢樣本DNA進(jìn)行擴(kuò)增,通過對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物的大小分析作出診斷。
優(yōu)點(diǎn):①靈敏度高,特異性好。②時(shí)間短,2-3小時(shí)出結(jié)果。③符合歐洲藥典。④操作簡(jiǎn)單。
缺點(diǎn):①對(duì)于已做支原體滅活處理的樣品,由于支原體DNA仍舊存在其中,PCR結(jié)果會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性。(可用培養(yǎng)法做補(bǔ)充驗(yàn)證)。②不同廠家生產(chǎn)的試劑盒質(zhì)量差異巨大(由于引物及內(nèi)在設(shè)計(jì)不同),需謹(jǐn)慎選擇,盡量在專業(yè)人員推薦指導(dǎo)下使用。
『支原體常規(guī)PCR檢測(cè)試劑盒』介紹:
德國(guó)MB公司生產(chǎn)的支原體常規(guī)PCR檢測(cè)試劑盒,依據(jù)操作步驟的細(xì)微差別,分一步法和經(jīng)典法兩類。此兩類試劑盒較全球其他廠家同類產(chǎn)品,具有以下*的優(yōu)點(diǎn):
①高特異性,270bp左右的一條陽(yáng)性對(duì)照條帶,涵蓋了所有可能感染細(xì)胞的支原體物種,操作簡(jiǎn)單,結(jié)果易于觀察。(使用MB的試劑盒,下表列出的支原體物種均為陽(yáng)性,其他微生物或真核細(xì)胞均為陰性。根據(jù)16s rRNA序列的同源性比對(duì),該試劑盒可檢測(cè)出1種脲原體、7種無(wú)膽甾原體和85種支原體。)
②高靈敏度,1-5拷貝/μl的支原體DNA即可檢出。
③試劑盒含內(nèi)控對(duì)照,可防止假陰性的發(fā)生。
④符合歐洲藥典要求。
常規(guī)PCR Kit(一步法)適用范圍:
A. 科研用戶,細(xì)胞上清的篩查可選用MB公司生產(chǎn)的支原體常規(guī)PCR檢測(cè)試劑盒(一步法)。(詳見下文)
【Venor® Gem OneStep (貨號(hào):11-8050)】或【Venor® Gem Advance (貨號(hào): 11-7096)】
B. 對(duì)于需遵循藥典要求的生物制藥企業(yè),可選用MB公司生產(chǎn)的支原體常規(guī)PCR檢測(cè)試劑盒(經(jīng)典法)。
【Venor® Gem Classic(貨號(hào): 11-1050) 】+ Taq酶 (貨號(hào): 53-1050)】
或【Venor® Gem Classic (貨號(hào): 11-1050G)】
特點(diǎn):
1. 內(nèi)控對(duì)照已加在預(yù)混液中,無(wú)需另外配置,使用便捷。
2.高特異性,僅一條陽(yáng)性對(duì)照條帶,即可涵蓋所有可能感染細(xì)胞的支原體物種。
操作簡(jiǎn)單,易于觀察。
3.高靈敏度,1-5拷貝/μl的支原體DNA即可檢出。
4.歐洲藥典要求的26種支原體均可檢出。該試劑盒可檢測(cè)出1種脲原體、7種無(wú)膽甾原體和85種支原體。
操作步驟:
下列圖示以Venor® Gem OneStep?支原體?常規(guī)PCR?檢測(cè)試劑盒?(一步法)( 貨號(hào):11-8050) 為例,具體產(chǎn)品操作以說明書為準(zhǔn)。
第1步:樣本處理
第2步:試劑制備
第3步:PCR體系建立
第4步:?jiǎn)?dòng)PCR反應(yīng)
第5步:電泳結(jié)果分析
191bp為內(nèi)控對(duì)照條帶,表明PCR反應(yīng)正常。
當(dāng)樣本存在支原體污染時(shí),由于內(nèi)控對(duì)照與支原體DNA存在競(jìng)爭(zhēng),內(nèi)控對(duì)照條帶變?nèi)酰ɡ缰гwDNA>103拷貝)。
陽(yáng)性對(duì)照中支原體DNA>104拷貝,內(nèi)控對(duì)照條帶會(huì)*消失。
可能在80-90bp存在引物自退火形成的條帶,此條帶不影響檢測(cè)結(jié)果。
如果待測(cè)樣本對(duì)PCR產(chǎn)生抑制,則內(nèi)控對(duì)照條帶變?nèi)酰ê完幮詫?duì)照相比),此時(shí)應(yīng)先進(jìn)行DNA抽提(推薦使用:Venor® Gem Sample Preparation Kit 支原體DNA抽提試劑盒),然后再檢測(cè)。
儲(chǔ)存條件
2~8℃至少12個(gè)月。復(fù)溶后必須在-18℃保存。
效期
1年6個(gè)月